原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

以胚胎小鼠為例
1．取材：將孕鼠拉頸椎處死，投入75%酒精浸泡數(shù)秒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蠟盤中用大頭針固定。用手術(shù)器械逐層分離皮膚和肌肉組織，打開(kāi)腹腔。注意不同的解剖層次使用不同的器械。后取出雙角置于無(wú)菌平皿內(nèi)。
2．用Hanks液洗滌3次，剪開(kāi)取出胚胎。血液和筋膜等組織。
3．用彎頭剪把胚胎盡量剪碎，每個(gè)組織塊小于1mm3。在操作時(shí)應(yīng)盡量將平皿蓋半蓋住平皿以防空氣中塵埃落下污染組織。再用Hanks液洗滌2~3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按兩種方法進(jìn)行，即消化法和組織塊培養(yǎng)法。
4．若使用消化法，則將組織塊放人三角燒瓶?jī)?nèi)加入10~30mL0.125%胰蛋白酶，37℃磁力攪拌消化20多min。然后加入少量血清終止消化。用幾層無(wú)菌紗布過(guò)濾。取過(guò)濾液，800r/min離心5~10min收集細(xì)胞。棄上清，加入帶有雙抗的培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
注：細(xì)胞分離的方法各實(shí)驗(yàn)室不同，所采用的消化酶也不相同（如膠原酶，透明質(zhì)酶等）。
5．若進(jìn)行組織塊培養(yǎng)，則不做步驟4，加入幾滴血清于組織塊中，再用彎頭吸管將組織塊懸液吸起。在一小培養(yǎng)瓶中逐個(gè)鋪展開(kāi)，注意將瓶底涂抹均勻。將瓶子翻轉(zhuǎn)倒置后在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置2－3h。待組織塊微干與瓶壁粘牢后再輕輕將瓶子翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，從邊角加入4~5mL培養(yǎng)基，使細(xì)胞接觸到培養(yǎng)基，放培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。

產(chǎn)品貨號(hào)	P-X1517	產(chǎn)品規(guī)格	5×105
組織來(lái)源	肺動(dòng)脈	生長(zhǎng)特性	貼壁
細(xì)胞形態(tài)	成纖維細(xì)胞樣	產(chǎn)品類別	大鼠原代細(xì)胞
傳代特性	可傳3代左右	用途	僅供科研

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自肺動(dòng)脈組織；肺動(dòng)脈亦稱肺動(dòng)脈干。在呼吸空氣的脊椎動(dòng)物中，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動(dòng)脈。肺動(dòng)脈起于右心室，在主動(dòng)脈之前向左上后方斜行，在主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈，經(jīng)肺門入肺。肺動(dòng)脈干位于心包內(nèi)，為一粗短的動(dòng)脈干。起自右心室，在升主動(dòng)脈前方向左后上方斜行，至主動(dòng)脈弓下方分為左、右肺動(dòng)脈。左肺動(dòng)脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進(jìn)入左肺上、下葉。右肺動(dòng)脈較長(zhǎng)而粗，經(jīng)升主動(dòng)脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進(jìn)入右肺上、中、下葉。肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞是肺血管的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在調(diào)控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的異常是肺動(dòng)脈高壓發(fā)展的重要病理學(xué)特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關(guān)鍵。研究表明，急性和慢性缺氧均可導(dǎo)致肺動(dòng)脈高壓，即缺氧性肺動(dòng)脈高壓，推斷缺氧可能是通過(guò)促進(jìn)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖而參與缺氧性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)展。肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞主要功能：①細(xì)胞表面表達(dá)介質(zhì)（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應(yīng)；②是多數(shù)重要?jiǎng)用}的靶細(xì)胞。肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化：①平滑肌易致肺動(dòng)脈高壓；②先天性肺動(dòng)脈狹窄；③肺動(dòng)脈栓塞。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞采用中性蛋白酶 - 膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

相關(guān)產(chǎn)品：

兔肝成纖維細(xì)胞 Rabbit liver fibroblasts	小鼠雜交瘤細(xì)胞；HB BrE-2
小鼠嗅鞘細(xì)胞 Mouse primary olfactory ensheathing cells	小鼠雜交瘤細(xì)胞；HB BADCPPF1-35B
DB (彌漫大B細(xì)胞瘤細(xì)胞) (STR鑒定正確)	人甲狀腺癌細(xì)胞(未分化)
小鼠肝枯否細(xì)胞	人霍奇金瘤細(xì)胞
MPC-83 (小鼠胰腺腺泡細(xì)胞)	兔肝成纖維細(xì)胞 Rabbit liver fibroblasts
人舌鱗狀癌細(xì)胞；CAL 27	人類結(jié)腸癌細(xì)胞系；DXH-1

人堿性胎兒蛋白(BFP)elisa分析檢測(cè)試劑盒	Ketohexokinase
大鼠白介素3(IL3)elisa檢測(cè)試劑盒	人丙酮酸激酶M2型工酶(M2-PK)elisa分析檢測(cè)試劑盒
BFPELISAKit	C3 ELISA Kit
環(huán)指蛋白5抗體（E3泛素蛋白連接酶RNF5）  Anti-RING5	魚(yú)補(bǔ)體蛋白3(C3)elisa分析檢測(cè)試劑盒
TSHR ELISA kit	ARTS/SEPT4
大鼠促甲狀腺素受體(TSHR)elisa分析檢測(cè)試劑盒	凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號(hào)抗體
跨膜蛋白TMED4抗體  Anti-TMED4	小鼠紅細(xì)胞**素受體(EPOR)elisa分析檢測(cè)試劑盒
DKC1	肝果糖激酶抗體
谷氨酸受體3A+3B抗體  Anti-NMDAR3A + 3B	冰凍切片彈性纖維（ELASTIC）馬森（MASSON）染色試劑盒
維生素D結(jié)合蛋白抗體  Anti-Vitamin D Binding protein	昆蟲(chóng)組蛋白提取試劑盒50T
Colla XVII/BP180	磷酸化D型受體抗體  Anti-Phospho-delta Opioid Receptor (Ser363)
XVII型膠原蛋白/膠原蛋白17/17型膠原蛋白抗體	人急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞；Jurkat
生長(zhǎng)抑素受體2抗體  Anti-SSTR2/Somatostatin Receptor 2	核仁蛋白NAP57抗體
乳腺癌、胃癌抗原GA55抗體  Anti-TACC1	N-乙酰神經(jīng)氨酸磷酸酶
C4orf32	神經(jīng)叢蛋白B1抗體  Anti-Plexin B1
NANP	大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框32抗體

注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。