ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
產(chǎn)品名稱:癌基因產(chǎn)物試劑盒
產(chǎn)品貨號:BJ-100417
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品保存:2-8℃,有效期6個月
主要組成成分:試劑
性狀:液體
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
96T指可以做94個標本,2個標準對照
48T指可以做47個標本,1個標準對照
96T-84個樣本
48T-42個樣本
待檢樣本:體液,血清,血漿,細胞培養(yǎng)上清液,尿液,組織勻漿,心房水標本等等。
本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
樣品收集、處理及保存方法
1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)**的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
組成結構:
1、 血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)**的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測
試劑盒成分:
1 預包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T
2 酶標記抗體: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1
3 標準品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5 標記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7 終止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標準品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標記抗體和顯色劑)
3,4-二甲氧基苯酚3,4-Dimethoxyphenol (purum, ≥99%)2033-89-85G
2,6-二甲氧基苯酚2,6-Dimethoxyphenol (≥99.0%)3351225G
親和素 (膠體金標記)Avidin-Gold Labeled antibodyNull0.5ML
2,3-二甲氧基苯酚2,3-Dimethoxyphenol (≥98%)5150-42-52.5G
兔抗大鼠IgG (膠體...Anti-Rat IgG-Gold antibody produced in...Null0.5ML
羊抗兔IgG (膠體金...Anti-Rabbit IgG-Gold antibody produced...Null0.5ML
奎尼丁Quinidine56-54-21G
兔抗豬IgG (膠體金...Anti-Pig IgG-Gold antibody produced in...Null0.5ML
D-葡萄糖醛酸D-Glucuronic acid (≥98%, GC)170090810G
羊抗小鼠IgG (膠體...Anti-Mouse IgG-Gold antibody produced ...Null0.5ML
羊抗人IgM (μ鏈特...Anti-Human IgM (μ-chain spec.)-Gold p...Null0.5ML
羊抗人IgG (膠體金...Anti-Human IgG-Gold antibody produced ...Null0.5ML
癌基因產(chǎn)物試劑盒FBXO42 FBXO42蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
PPIA/Cyclophilin A 親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIA抗體 規(guī)格: 0.1ml
NPR2L/G21 protein G21蛋白質(zhì)抗體 規(guī)格: 0.2ml
HDL 高密度脂蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
BTNL8 嗜脂蛋白樣8抗體 規(guī)格: 0.2ml
Bad 相關死亡促進因子Bad抗體 規(guī)格: 0.1ml
CARD8 凋亡加強結構域蛋白8抗體 規(guī)格: 0.1ml
ANKRD33B 錨蛋白重復結構域蛋白33B抗體 規(guī)格: 0.2ml
CTn1/Troponin I/TNNC1 心肌肌鈣蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-human IgG/Bio 生物素標記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG 兔抗馬IgG 規(guī)格: 1mgTLK2 絲氨酸/蘇氨酸激酶TLK2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Collagen VIII alpha 1 8型膠原抗體(內(nèi)皮膠原蛋白) 規(guī)格: 0.2mlCLN3 神經(jīng)細胞蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN3抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL-6 白介素6抗體 規(guī)格: 0.1mlDACH1 細胞命運決定因子DACH1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-TAK1(Thr184) 磷酸化轉(zhuǎn)化生因子β活化激酶1 規(guī)格: 0.1mlVTN/Vitronectin 玻璃粘連蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
EF1a 翻譯延伸因子EF-1a抗體 規(guī)格: 0.2mlCDK11 周期素依賴性激酶11抗體 規(guī)格: 0.2ml