RT-qPCR原理的三個(gè)主要步驟：

1、反轉(zhuǎn)錄：

·使用逆轉(zhuǎn)錄酶和特定引物將RNA樣品反轉(zhuǎn)錄成cDNA。

·該步驟將RNA模板轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定且可擴(kuò)增的DNA形式。

·反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中使用特定引物。

2、PCR擴(kuò)增：

·使用特定引物對(duì)cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，這些引物環(huán)繞目標(biāo)區(qū)域。

·PCR是一個(gè)循環(huán)過(guò)程，呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)增DNA模板的數(shù)量。

·PCR反應(yīng)中包含熒光染料或探針，它們結(jié)合到擴(kuò)增的DNA序列上并發(fā)出熒光信號(hào)。

3、熒光實(shí)時(shí)檢測(cè)：

·使用實(shí)時(shí)PCR儀器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)。

·熒光的數(shù)量與每個(gè)PCR循環(huán)中擴(kuò)增的DNA數(shù)量成比例。

·使用專業(yè)軟件分析數(shù)據(jù)以確定循環(huán)閾值（Ct）值，該值表示熒光信號(hào)達(dá)到特定閾值水平所需的循環(huán)數(shù)。Ct值用于計(jì)算原始樣品中存在的目標(biāo)DNA量，從而允許進(jìn)行基因表達(dá)或病毒載量等定量分析。