1、 細胞凍存的原理

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一，也是保持細胞活性和增殖能力的重要手段。細胞可以通過被暫時休眠（凍存），仿佛童話里的睡美人，留住年輕芳華，等到需要時再被輕輕喚醒（復(fù)蘇）。

低溫下，活細胞中的生物和化學(xué)反應(yīng)都會大大降低，為細胞長期凍存提供了可能。冷凍對大多數(shù)活生物體都是致命的，細胞凍存是利用冷凍保護劑來降低冰點，緩慢凍結(jié)細胞的過程中，細胞內(nèi)水分透出細胞，使細胞凍結(jié)中冰晶形成減少，從而避免了由于冰晶形成對細胞中生命活性物質(zhì)的一系列損傷?！?】細胞凍存時利用低溫降低細胞代謝，使細胞處于停止生長的“休眠”狀態(tài)，等需要使用的時候再進行復(fù)蘇操作。

細胞儲存在-70℃冰箱中，可以保存一年；若儲存在-196℃的液氮環(huán)境中，理論上可以實現(xiàn)長期永存。

2、 細胞凍存的常見方法

細胞凍存和復(fù)蘇的關(guān)鍵要點是慢凍快融。細胞凍存的效果主要與降溫步驟、凍存保護液的使用、凍存溫度、復(fù)溫速率及用于凍存的細胞生長狀態(tài)有關(guān)。降溫速率過快容易引起細胞內(nèi)冰晶損傷，所以為防止細胞內(nèi)結(jié)冰必須采用一個“慢”的降溫過程，并使用凍存保護劑，即凍存液。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作保護劑。

根據(jù)降溫速度區(qū)分，細胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。傳統(tǒng)的凍存方法是將冷凍管置于4℃ 30分鐘、-20℃ 30分鐘、-80℃過夜再轉(zhuǎn)液氮。這種凍存方法步驟多，而且需要遵守幾個時間點，容易被遺忘，對于繁忙的實驗人員而言不那么友好。而程序降溫方法，采用降溫速率-1℃～-2℃/min；當(dāng)溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min，再放至-196℃液氮保存。常規(guī)的程序降溫凍存方法較為復(fù)雜、費時，需要儀器設(shè)備花費較高，所以非程序降溫凍存方法便應(yīng)運而生，它能大大簡化凍存流程，細胞可直接置于-80°C冰箱完成凍存過程，更為簡便高效。