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分析流式與werstern細(xì)胞的區(qū)別

日期:2025-04-18 23:32
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摘要: 分析流式與werstern細(xì)胞的區(qū)別: 1、Western 是檢測蛋白表達(dá)的金標(biāo)準(zhǔn),可用于檢測細(xì)胞多種類型的蛋白;流式細(xì)胞術(shù)的方法多用于檢測細(xì)胞膜蛋白,雖然也可通過Triton-X100給細(xì)胞打孔的方法來檢測胞內(nèi)蛋白,但對于分泌蛋白卻是無能為力的; 2、Western測蛋白含量對抗體的量需要很少,一般1:1000左右,而流式對抗體的需要量很大,一般1:50(很浪費(fèi)抗體); 3、采用Western方法檢測細(xì)胞蛋白含量的變化一般要有內(nèi)參,而流式一般要把每個樣品分為兩份,同時都做只加二抗(FITC標(biāo)記的)的對照,這樣平均到每個細(xì)胞的...

分析流式與werstern細(xì)胞的區(qū)別:

1、Western 是檢測蛋白表達(dá)的金標(biāo)準(zhǔn),可用于檢測細(xì)胞多種類型的蛋白;流式細(xì)胞術(shù)的方法多用于檢測細(xì)胞膜蛋白,雖然也可通過Triton-X100給細(xì)胞打孔的方法來檢測胞內(nèi)蛋白,但對于分泌蛋白卻是無能為力的;

2、Western測蛋白含量對抗體的量需要很少,一般1:1000左右,而流式對抗體的需要量很大,一般1:50(很浪費(fèi)抗體);

3、采用Western方法檢測細(xì)胞蛋白含量的變化一般要有內(nèi)參,而流式一般要把每個樣品分為兩份,同時都做只加二抗(FITC標(biāo)記的)的對照,這樣平均到每個細(xì)胞的發(fā)光就不用內(nèi)參了;

4、就個人經(jīng)驗(yàn)而言,流式用多抗不好,單抗標(biāo)出來不錯。

不過流式的應(yīng)用原理主要還是抗原和抗體反應(yīng)和western、免yi組化沒有本質(zhì)差別,但是由于免yi組化和western都有酶催化底物的放大體系,因此,流式不適合檢測低表達(dá)的蛋白,低表達(dá)的還是采用western(尤其是化學(xué)發(fā)光底物更佳)和免yi組化更好。當(dāng)然,流式*大的一個特點(diǎn)就是,可以定量(百分比),如果是高表達(dá)的用流式細(xì)胞儀非常有優(yōu)勢。