Western Blot常用來比較不同條件下或不同細(xì)胞組織中目標(biāo)蛋白表達(dá)量的相對多少，因此必須先確定上樣量相同，才有比較的基礎(chǔ)。在Western Blot實驗中，可能因總蛋白濃度測定不準(zhǔn)確，或是蛋白質(zhì)上樣時因操作產(chǎn)生誤差，所以必須設(shè)置內(nèi)部參照組來進行校正。此內(nèi)部參照必須在不同細(xì)胞或組織間表達(dá)相對恒定，且有高水平的表達(dá)量，來確保不同樣品間蛋白定量相同。而這樣的參照蛋白，就稱為內(nèi)參，對應(yīng)的抗體就稱為內(nèi)參抗體。內(nèi)參抗體有以下三個：

1、beta Actin，肌動蛋白，細(xì)胞骨架蛋白。它們在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，在檢測蛋白的表達(dá)水平變化時常用它來做參照物。beta Actin 作為內(nèi)參是得到公認(rèn)的，針對大多數(shù)組織和細(xì)胞來說的，它廣泛分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，表達(dá)量非常豐富。但是在一些少量特殊的情況下比如脂肪組織和細(xì)胞內(nèi)，beta Actin 的表達(dá)量就很少。

2、GAPDH，甘油醛-3-磷酸脫氫酶，該酶是糖酵解反應(yīng)中的一個酶，幾乎在所有組織細(xì)胞中都高水平表達(dá)，在同種細(xì)胞或組織中的表達(dá)量一般是恒定的，且很少受外部誘導(dǎo)物的影響。但比如缺氧和糖尿病等ji 病存在下，會增加 GAPDH 在特定細(xì)胞和組織中的表達(dá)。

3、beta Tubulin，微管蛋白，細(xì)胞骨架蛋白?！睛?Tubulin小鼠單克隆抗體(3G6)，#A01030】 作為內(nèi)參抗體，beta Tubulin 表達(dá)通常不會發(fā)生改變，因此被廣泛用于 Western Blot 內(nèi)參，也常被用于免yi 染色觀察細(xì)胞的微管結(jié)構(gòu)。