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免 疫熒光定位不對的原因及解決方法
日期：2025-04-18 13:30
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摘要：
免 疫熒光定位不對的原因及解決方法：
細(xì)胞核干擾
細(xì)胞核位置前面的細(xì)胞質(zhì)染色干擾，可能是抗體濃度過高或孵育時間過長?？梢試L試降低抗體濃度，或者縮短孵育時間，讓信號更“純凈”。
細(xì)胞或組織狀態(tài)不對
細(xì)胞或組織狀態(tài)不好，可能導(dǎo)致目標(biāo)蛋白的細(xì)胞定位異常。如果一直出現(xiàn)定位不對的問題，建議重新培養(yǎng)細(xì)胞，調(diào)整狀態(tài)，或者重新取材，進(jìn)行再次染色。
共定位問題
如果想證明某一細(xì)胞發(fā)生某種變化，比如既有某種蛋白表達(dá)，又有另一種蛋白表達(dá)，這就是共定位。如果兩種蛋白不屬于共...
免 疫熒光定位不對的原因及解決方法：
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細(xì)胞核干擾
細(xì)胞核位置前面的細(xì)胞質(zhì)染色干擾，可能是抗體濃度過高或孵育時間過長?？梢試L試降低抗體濃度，或者縮短孵育時間，讓信號更“純凈”。 -
細(xì)胞或組織狀態(tài)不對
細(xì)胞或組織狀態(tài)不好，可能導(dǎo)致目標(biāo)蛋白的細(xì)胞定位異常。如果一直出現(xiàn)定位不對的問題，建議重新培養(yǎng)細(xì)胞，調(diào)整狀態(tài)，或者重新取材，進(jìn)行再次染色。 -
共定位問題
如果想證明某一細(xì)胞發(fā)生某種變化，比如既有某種蛋白表達(dá)，又有另一種蛋白表達(dá)，這就是共定位。如果兩種蛋白不屬于共定位，比如一種在膜上表達(dá)，一種在胞漿表達(dá)，這屬于共表達(dá)。這種情況下，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需要重新調(diào)整，驗(yàn)證結(jié)論。 -
核定位不對
核內(nèi)表達(dá)的抗原定位可以用免 疫熒光或免 疫酶標(biāo)。如果定位不正確，建議將封閉和打孔合為一步，即在封閉液中添加0.5% Triton-100，37℃封閉2小時。加一抗后zui好4℃孵育過夜（16小時）。